山楂提取物具有抗氧化、清除自由基等作用。多數學者認為，黃酮和低聚前花青素是山楂提取物的兩類主要活性物質。用液相色譜法(HPLC)對其進行分析的報道較多，但是到目前為止尚未見到能同時分析這些成分的令人滿意的方法。本文建立了一種能同時分析山楂果實中這些活性成分的HPLC方法。

　　
　　1實驗部分
　　
　　1．1試驗材料
　　
　　表兒茶素、綠原酸，購于Sigma公司；前花青素B2、金絲桃苷、Isoquercitrin，購于日本Funakoshi試劑公司；前花青素B5、C1，以山楂果為原料經SephadexLH20柱分離、制備型HPLC精制。其余試劑為分析純。
　　
　　1．2樣品處理方法
　　
　　取山楂果去籽切碎混勻，稱取2g放入研缽中，加甲醇2mL、50％磷酸水溶液100μL，研磨后用甲醇轉移到25mL容量瓶中定容，用超聲波振蕩提取l0min，取1mL于4000r/min轉速下離心5min，上清液過0.45μm濾膜備用。
　　
　　1．3色譜分析條件
　　
　　液相色譜系統由兩臺P200Ⅱ高壓恒流泵、UV200Ⅱ紫外．可變波長檢測器以及Echrom98色譜工作站等(大連依利特分析儀器有限公司)組成。色譜柱為HYPERSILBDS分析柱(200mm×4.6mmi．d．，5μm)。流動相A：20％(體積分數)甲醇水溶液(pH3.2O)，流動相B：30％(體積分數)乙腈水溶液(pH3.2O)，得線性梯度洗脫程序；流速0.6mL／min；檢測波長280nm；進樣量1OμL；以外標法定量。
　　
　　2結果與討論
　　
　　2．1色譜條件的確定
　　
　　山楂果實中活性物質大多為多酚類成分，這些成分的極性差異很大，很難在等度洗脫條件下同時分離。在乙腈-水體系中弱極性的黃酮類成分保留時間較長，分離效果較好；而甲醇-水體系對低聚前花青素類極性成分的洗脫能力較強，適于樣品中極性成分的分離。在酸性體系下酚酸成分分離較好，其他酚類成分也需要在酸性條件下進行分離，所以把流動相pH確定為3.1O～3.2O。綠原酸、兩種黃酮和前花青素類物質在280nm處都有較強的信號，故確定檢測波長為280nm。本文采用酸性的甲醇水溶液和乙腈水溶液在優化的梯度洗脫程序下洗脫，使山楂的主要活性成分在35min內得到了較好的分離。
　　
　　2．2方法評價
　　
　　在梯度條件下，用綠原酸，表兒茶素，前花青素B2、B5、C1，金絲桃苷和Isoquercitrin標準品進行分析，各成分的回歸方程(Y：峰面積；X：含量，μg)和相關系數r依次為：Y=1.354 29.93，r=0.9998；Y=1.O54X一3.748，r=0.9998；Y=0.673一22.489，r=0.9997；Y=0.538 4.665．r=0.9999；Y=0.700X一6.614，r=0.9998；Y=2.393 46.250，r=0.9995；Y=2.855一90.520，r=0.9996。相對標準偏差(n=5)分別為：2.15％，2.21％，4.57％，2.69％，3.06％，1.44％，1.38％。線性范圍(μg)分別為：0.O689～0.2260，0.0469～0.3350，0.1355～0.3660，0.1250～0.8230，0.1282～0.6510．0.2078～0.9870，0.3275～0.8370。回收率分別為：95.2％，105.8％，103.996，
　　
　　97.7％，96.2％，93.9％和94.O％。方法準確靈敏，定量可靠。